汾阳尖锐湿疣医院          　尖锐湿疣是一种性传播疾病，成人患病多与不洁性交有关，儿童患病多与性接触以外的传播方式有关，但对大龄儿童患尖锐湿疣则要考虑有性虐待的因素。

 

　　国外有一些学者认为虽然儿童没有性行为，但也可能通过性暴力或性虐待感染人类乳头瘤病毒（HPV），继而发生尖锐湿疣。在判断儿童因性虐待而发生尖锐湿疣的问题上要持谨慎态度，不仅要排除其他可能传播的途径，还要有遭受性虐待额确凿证据，如患儿有睡眠紊乱、恐惧、畏缩、过分服从、服从配合姿势等异常行为。相关的调查分析发现，儿童尖锐湿疣患者遭遇性虐待的比例高达40%～80%，年龄集中在8～12岁，女童多于男童，比例约为2:1，疣体主要发生在肛门、尿道口、阴唇等部位。

 

　　另有少数学者认为大龄儿童患尖锐湿疣是由性乱引起的。对于此种说法也同样应持谨慎的态度，除非有确凿的证据表明患儿有性接触，否则应多考虑其他传播途径。相关的调查分析发现，约三成的患儿有性接触史，女童居多，发生部位集中在肛周、阴唇等处。

 

　　尖锐湿疣的传播途径主要是性接触传播和间接接触，因此当夫妻一方患尖锐湿疣后，要与配偶“性隔离”，除此以外，还要注意以下几点。

 

　　1、避免亲密接触　　尖锐湿疣不仅能通过直接的性行为传播给配偶，同时患者的眼泪、汗液、精液、唾液、血液等体液都有可能作为传播途径，所以在疾病没有获得治愈之前，是绝对不能有性接触的，也不能有接吻、爱抚等亲密动作。尖锐湿疣疣体消失后，人类乳头瘤病毒可能还会在患者体内潜伏一段时间，因此不能简单地以没有疣体作为治愈的标准，何时可以恢复正常的性生活，要得到医生的指导。

 

　　2、避免间接接触传播　　夫妻一方患病时，其配偶要与其分床而居，患者的被褥、毛巾、脸盆、衣物要与家人分开洗涤，已被污染的生活用品，可用肥皂水冲洗、开水煮烫、阳光暴晒及喷洒消毒液等方法消毒灭菌。

 

　　3、夫妻同治　　夫妻一方患了尖锐湿疣，应该夫妻双方同时检查或治疗，单治一方效果不佳，即使配偶未感染或未出现相应的症状表现，也应积极的预防治疗，以防夫妻间的交叉感染。

 

 

　　汾阳尖锐湿疣医院           尖锐湿疣是感染人类乳头瘤病毒（HPV）而引起的一种表皮瘤样增生。尖锐湿疣的诊断多根据皮疹特点、发病部位、发展情况结合可能询及的接触史来判断，但少数病人要进行一些辅助实验来确诊。具体实验诊断方法介绍如下：

 

　　一、醋酸白试验

 

　　用3-5%醋酸外涂疣体2-5分钟，病灶部位变白稍隆起，肛门病损可能需要15分钟。本试验的原理是蛋白质与酸凝固变白的结果，HPV感染细胞产生的角蛋白与正常的未感染上皮细胞产生的不同，只有前者才能被醋酸脱色。醋酸白试验检测HPV的敏感性很高，它比常规检测观察组织学变化还好。但偶尔在上皮增厚或外伤擦破病例中出现假阳性、假阳性变白迹象显得界限不清和不规则。美国CDC提示，醋酸白试验并不是特异试验，且假阳性较常见。

 

　　二、免疫组织学检查

 

　　常用过氧化物酶抗过氧化物酶方法（即PAP），显示湿疣内的病毒蛋白，以证明疣损害中有病毒抗原。HPV蛋白阳性时，尖锐湿疣的浅表上皮细胞内可出现淡红色的弱阳性反应。

 

　　三、组织化学检查

 

　　取少量病损组织制成涂片，用特异抗人类乳头瘤病毒的抗体作染色。如病损中有病毒抗原，则抗原抗体结合。在过氧化物酶抗过氧化物酶（PAP）方法中，核可被染成红色。此法特异性强且较迅速，对诊断有帮助。

　　四、病理检查

 

　　主要为角化不全，棘层高度肥厚，乳头瘤样增生，表皮突增厚，延长，其增生程度可似假性上皮瘤样。刺细胞和基底细胞并有相当数量的核分裂、颇似AI-G变。但细胞排列规则，且增生上皮和真皮之间界限清楚。其特点为粒层和刺层上部细胞有明显的空泡形成。此种空泡细胞较正常大，胞浆着色淡、中央有大而圆，深嗜碱性的核。通常真皮水肿、毛细血管扩张以及周围较致密的慢性炎性浸润。Bushke-loewenstein巨大型尖锐湿疣，表皮极度向下生长，代替了其下面的组织、易与鳞状细胞相混，故须多次活检。若有缓慢发展之倾向，则为一种低度恶变的过程，即所谓疣状AI-G。

 

　　五、基因诊断

 

　　迄今，HPV难于用传统的病毒培养及血清学技术检测，主要实验诊断技术是核酸杂交。近年来发展的PCR方法具有特异、敏感、简便、快速等优点，为HPV检测开辟了新途径。

 

　　（一）标本的采集及处理

 

　　1.标本的采集和预处理：用刮板或生理盐水浸润的棉棒从阴道和宫颈外口取分泌物和细胞。在作细胞学检查的同时，将标本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS离心（3000g，10min）洗涤2次，沉积细胞重悬于1mlPBS中，取0.5ml细胞悬液抽提。

 

　　2.标本核酸的提取：按1体积细胞悬液加10倍体积的细胞裂解液（10mmol/L Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA，150mmol/L NaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K）37℃下处理过夜;且等体积酚/氯仿（1:1），氯仿/异戊醇（24:1）各抽提2次;加1/10体积3mol/L NaAc（pH 5.2）及2.5倍体积无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶（100μg/ml）的TE液（10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA）溶解DNA，37℃温育。

 

　　（二）PCR扩增

 

　　1. 引物设计和合成：HPV基因组可分为早期区（E）和晚期区（L），每区含一系列开放读码框架（ORF）。序列分析表明，各型HPV的非编码区及E1、E6、E7和L1区均有保守序列。Manos等从HPVL1区中选择保守序列设计合成引物MY11和MY09见表1，该引物与HPV 6、11、16、18及33型有互补序列，也可扩增其它型。

 

　　2.PCR反应试剂：Taq DNA聚合酶（2U/ml）、10mmol/L dNTP贮备液（dATP、dCTP、dGTP、dTTP各10mmol/L），10×PCR缓冲液（500mmol KCl、40mmol/L MgCl2、100mmol/L Tris-HCl、pH 8.5），100μmol/L MY11和MY09贮备液，灭菌的玻璃蒸馏器制备的蒸馏水。

 

　　3.PCR扩增方法和程序：以100μl PCR反应液，用无菌0.5ml硅化塑料离心管为反应管进行扩增反应。

 

　　（1）实验前配制预混反应试剂并分装。预混反应试剂包括除标本DNA外的其它各种PCR反应试剂。每支反应管中含有的PCR反应试剂。

 

　　（2）各反应管依次加入10μl标本和90μl预混反应试剂。

 

　　（3）加入80-100μl石蜡油，在台式离心机上快速离心数秒钟，使各反应试剂收集于油层下。目前，PCR试剂已商品化，反应体积为25μl。使用时只加入标本DNA即可。

 

　　（4）将反应管置PCR扩增仪上，循环参数为95℃ 30s，55℃ 40s，72℃ 50s循环35次，最后72℃延伸5min。

 

　　4.每次试验应设阳性及阴性对照。以载有HPV的重组质粒（每反应为100pg）或含有HPV的细胞系（如癌ski、HeLa）DNA为阳性对照，以无HPV的人细胞系DNA为阴性对照。

 

　　（三）扩增产物的检测和分析

 

　　1. 凝胶电泳：扩增反应结束后，取出反应管，冷却至室温，取10μl扩增产物用5%-7%聚丙烯酰胺凝胶或1.5%琼脂糖电泳，溴化乙锭染色，紫外分析仪下分析结果，分子量约为450bp处出现明显的DNA带。

 

　　2. 核酸杂交：如果凝胶电泳无清楚的DNA或需确定DNA带的特异性时，可用标记的公用混合探针和（或）型特异探针作Southern吸印杂交、斑点杂交验证。

 

　　按照标准方法制32P ATP标记的寡核苷酸探针，需达到约107cpm/pmol特异活性。杂交液中需含有2×106-5×106cpm探针/ml。在55℃缓慢振荡下杂交2-3h，随后于30-55℃下用洗涤液（2×SSC、0.1%SDS）迅速冲洗杂交膜，除去多余探针。然后进行洗膜，其条件依所用探针而异：公用混合探针，55℃洗膜10min;MY12、MY13及MY16探针，56-57℃下10 min，并换液重洗1次;MY14及WD74探针，58-59℃下10min，亦换液重洗1次。

 

　　用PCR方法检测HPV比核酸杂交方法优越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝胶电泳直接分析结果，可检出标本中200个拷贝的HPV DNA，若以核酸杂交检测PCR产物，敏感性提高，能检出10个拷贝的HPV DNA。

 

　　鉴于PCR技术的高度敏感性，以生殖道脱落细胞为检材足以满足试验要求，避免了活检取材、研磨组织繁杂操作。一般情况下，PCR扩增产物经凝胶电泳，观察产生的DNA可直接作出诊断。因此，PCR技术检测HPV实验周期短、简便快速。